Identificazione, smistamento e profilazione di cellule killer funzionali tramite la cattura di target fluorescenti

Nature Biomedical Engineering (2023) Citare questo articolo

Dettagli sulle metriche

I test per valutare la citotossicità cellulo-mediata sono in gran parte incentrati sulla cellula bersaglio e non possono identificare e isolare sottopopolazioni di cellule effettrici citotossiche. Qui descriviamo un test compatibile con la citometria a flusso per l'identificazione accurata e lo smistamento delle sottopopolazioni funzionali di cellule killer nelle co-colture. Il test, che abbiamo chiamato PAINTKiller (per "identificazione del trasferimento intracellulare di prossimità per affinità delle cellule killer"), si basa sul rilevamento di una proteina fluorescente intracellulare "dipinta" da una cellula lisata sulla superficie della cellula citotossica in lisi (in particolare, sulla cellula lisi, il derivato intracellulare della fluoresceina (carbossifluoresceina succinimidil estere) viene catturato sulla superficie della cellula killer naturale da un anticorpo per l'isotiocianato anti-fluoresceina legato a un anticorpo per il recettore di superficie pan-leucocitario CD45). Il test può essere integrato con il sequenziamento dell'RNA di singola cellula per l'analisi dei percorsi molecolari associati alla citotossicità cellulare e può essere utilizzato per scoprire i correlati delle risposte immunitarie funzionali.

Questa è un'anteprima dei contenuti dell'abbonamento, accessibile tramite il tuo istituto

Accedi a Nature e ad altre 54 riviste Nature Portfolio

Ottieni Nature+, il nostro abbonamento con accesso online dal miglior rapporto qualità-prezzo

$ 29,99 / 30 giorni

annullare in qualsiasi momento

Iscriviti a questo diario

Ricevi 12 numeri digitali e accesso online agli articoli

$ 79,00 all'anno

solo $ 6,58 per numero

Noleggia o acquista questo articolo

I prezzi variano in base al tipo di articolo

da $ 1,95

a $ 39,95

I prezzi possono essere soggetti a tasse locali calcolate durante il checkout

I set di geni distintivi curati sono disponibili pubblicamente dal database delle firme molecolari (MSigDB, v.7.4). I dati di sequenziamento di PAINTKiller-seq sono disponibili nel database GEO, con numero di accesso GSE207508. Tutti i dati necessari per valutare le conclusioni descritte in questo documento sono inclusi nel documento e nelle sue informazioni supplementari. I set di dati grezzi e analizzati generati durante lo studio sono disponibili per scopi di ricerca presso gli autori corrispondenti su richiesta ragionevole. I dati di origine sono forniti con questo documento.

Il codice R per riprodurre le analisi mostrate nelle figure è disponibile su Zenodo all'indirizzo https://doi.org/10.5281/zenodo.8004120.

Kagi, D., Ledermann, B., Burki, K., Zinkernagel, RM & Hengartner, H. Meccanismi molecolari della citotossicità mediata dai linfociti e loro ruolo nella protezione immunologica e nella patogenesi in vivo. Anna. Rev. Immunol. 14, 207–232 (1996).

Articolo CAS PubMed Google Scholar

Prager, I. & Watzl, C. Meccanismi di citotossicità cellulare mediata da cellule killer naturali. J. Leukoc. Biol. 105, 1319–1329 (2019).

Articolo CAS PubMed Google Scholar

Brunner, KT, Mauel, J., Cerottini, JC & Chapuis, B. Saggio quantitativo dell'azione litica delle cellule linfoidi immunitarie su cellule bersaglio allogeniche marcate con 51Cr in vitro; inibizione da parte di isoanticorpi e di farmaci. Immunologia 14, 181–196 (1968).

CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Sepp, A., Binns, RM & Lechler, RI Protocollo migliorato per il rilevamento colorimetrico della citotossicità mediata dal complemento basato sulla misurazione dell'attività della lattato deidrogenasi citoplasmatica. J. Immunol. Metodi 196, 175–180 (1996).

Articolo CAS PubMed Google Scholar

Wong, P., Wagner, JA, Berrien-Elliott, MM, Schappe, T. & Fehniger, TA Test di citotossicità delle cellule NK murine ex vivo basato su citometria a flusso. Protocollo STAR. 2, 100262 (2021).

Articolo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Kandarian, F., Sunga, GM, Arango-Saenz, D. & Rossetti, M. Un test di citotossicità basato sulla citometria a flusso per la valutazione dell'attività delle cellule NK umane. J.Vis. Esp. (126), e56191 (2017).